液氮冷凍研磨機(jī)的設(shè)計(jì)人性化、安全高效、耐用、操作簡單、準(zhǔn)確性和重現(xiàn)性好、避免樣品間的交叉污染，適應(yīng)不同客戶的各種需求，是*的“研磨手段”，廣泛應(yīng)用于生物化學(xué)、動(dòng)植物、醫(yī)學(xué)、礦物學(xué)、材料科學(xué)等領(lǐng)域。

　　液氮冷凍研磨提取RNA該如何進(jìn)行？一起來看看：

　　1.用75%酒精對(duì)實(shí)驗(yàn)操作臺(tái)、移液槍、槍頭盒、管架進(jìn)行消毒，然后再用RNase Zap擦拭上述材料。

　　2.取出-80℃冰箱保存的組織塊，放于用液氮預(yù)冷過的研缽中，敲碎一小塊組織，其余放回凍存管。

　　3.加入液氮，先輕輕敲碎組織到小塊，再研磨成粉末，直到看不到組織塊。

　　4.加入液氮使粉末凝聚成團(tuán)，馬上用藥勺把粉末轉(zhuǎn)移到2.0ml EP管中。

　　5.待液氮揮發(fā)干后，加入1ml Trizol裂解液，用1ml移液器將細(xì)胞吹散開，保證細(xì)胞裂解充分，必要時(shí)可借助水平振蕩器混勻。

　　6.4℃離心機(jī)12000rpm離心5分鐘，棄沉淀。

　　7.加入CHCl3，比例200ul CHCl3/ml Trizol，顛倒混勻，室溫放置15分鐘。

　　8.于4℃離心機(jī)12000g離心15分鐘。取上清液，注意吸取上清是無觸碰到中間層或下層。

　　9.取上清液，注意吸取上清是無觸碰到中間層或下層。

　　10.加入等體積異丙醇，-20℃沉淀1小時(shí)。

　　11.于4℃離心機(jī)12000g離心10分鐘。

　　12.棄上清，加入1ml 75%酒精漂洗沉淀，于4℃離心機(jī)800g離心5分鐘。必要時(shí)可重復(fù)酒精洗滌。

　　13.棄上清，可選擇再次離心去除殘留的乙醇，沉淀在安全柜內(nèi)晾干，切忌過干，只需目測乙醇揮發(fā)干即可。

　　14.根據(jù)沉淀的大小，使用無RNA酶的水將RNA沉淀充分溶解。選擇溶解沉淀的體積，一般為30-100ul。測RNA濃度，此方法RNA A260/A280值在1.6-1.8之間。

　　15.電泳檢測RNA完整性，0.5XTBE Buffer，110V電泳30分鐘。

　　16.后將沉淀保存在-80℃低溫冰箱。